骨髓間充質干細胞，又稱骨髓基質干細胞，是存在于骨髓造血微環境中的一類多能成體干細胞，具有自我更新能力及向成骨、成軟骨、成脂等多向分化潛能，并分泌多種營養因子與免疫調節分子。大鼠骨髓間充質干細胞（RatBMSCs）通常取自SD或Wistar大鼠股骨與脛骨的骨髓腔，經全骨髓貼壁法或密度梯度離心法分離、擴增獲得，是骨科組織工程、神經損傷修復及免疫調節機制研究的常用原代細胞模型，也是大鼠異位骨形成、骨折愈合等體內實驗的種子細胞來源。
 

　　原代分離與培養原理

　　常用為全骨髓貼壁法：

　　脫頸處死SPF級大鼠，75%乙醇浸泡消毒，無菌取出股骨、脛骨，剪除骨骺；

　　用注射器吸取含10%FBS的低糖DMEM或α-MEM培養基沖洗骨髓腔，收集紅色骨髓懸液；

　　經200目篩網或70μm細胞篩去除骨碎片與團塊，離心收集細胞沉淀重懸后接種于培養瓶；

　　置于37℃、5%CO?培養箱，48小時后半換液——未貼壁的血細胞與造血祖細胞隨換液被移除，BMSCs因具玻璃/塑料表面貼壁特性而保留并逐步鋪展為梭形成纖維樣克隆；

　　后續每2～3天換液，匯合80%～90%時按1:2～1:3胰酶消化傳代，通常P3～P5代細胞表型均一性較好。

　　密度梯度離心法（Percoll或Ficoll分離單個核細胞層）可提高初始純度但得率略低。

　　鑒定標準（ISCT2006指南參照）

　　大鼠BMSCs需滿足：

　　形態：梭形、旋渦狀生長，折光性好；

　　表面標志物（流式）：陽性CD90（Thy-1）、CD29（整合素β1）、CD44、CD73（SH3/SH4），陰性CD34、CD45（造血系）、CD11b/c（巨噬細胞/粒細胞）、MHCII（大鼠多不表達或低表達）；

　　多向分化潛能驗證：成骨誘導（抗壞命酸+β-甘油磷酸鈉+地塞米松）→茜素紅染色鈣結節陽性；成脂誘導（胰島素+IBMX+地塞米松+吲哚美辛）→油紅O染色脂滴陽性；成軟骨誘導（TGF-β3+地塞米松+抗壞命酸）→阿爾新藍染色蛋白聚糖陽性。

　　主要應用領域

　　組織工程與骨/軟骨修復：復合生物支架（如羥基磷灰石、膠原海綿）植入骨缺損或關節軟骨缺損大鼠模型評估新骨形成；

　　神經損傷修復：脊髓損傷、腦缺血模型中鞘內或局部移植BMSCs觀察運動功能恢復（BBB評分）及神經營養因子（BDNF、NGF）分泌；

　　免疫調節與移植物抗宿主病（GVHD）研究：BMSCs可抑制T細胞增殖、誘導調節性T細胞（Treg）生成，在大鼠同種異體移植模型中評估免疫耐受誘導；

　　藥物/基因治療載體：經轉染攜載BMP-2、VEGF等基因的BMSCs用于局部因子持續釋放研究；

　　干細胞微環境（Niches）與衰老機制：比較不同代次、不同供體年齡BMSCs的端粒酶活性、ROS水平及成骨偏移趨勢。

　　大鼠骨髓間充質干細胞以其易獲取、體外擴增能力強及與人MSCs高度同源的生物學行為，成為連接干細胞基礎研究與臨床前大動物實驗之間的重要過渡模型，是再生醫學領域常用的原代干細胞資源之一。